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ELISA試劑盒各項實驗條件的選擇是很重要

時間:2018/2/1閱讀:238
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ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的試驗確診辦法。因為其試劑安穩、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等要素,已廣泛應用在免疫學查驗的各領域中,進行各項試驗條件的挑選是很重要的,其間包含:
(1) 固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗條件下進行反響,調查其顯色反響是否均一性,據此判明其吸附功能是否杰出。
(2) ELISA試劑盒包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的*適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,調查陽性標本的OD值。挑選OD值而蛋白量*少的濃度。對于大都蛋白質來說一般為1~10μg/ml。
(3) 酶符號抗體作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式試驗系統里準確地滴定其作業濃度。
(4) ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應注意防護。elisa試劑盒有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后,應參加強酸或強堿以停止反響。一般底物效果時刻,以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造,尤其是H2O2在臨用前參加。

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