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定性測定ELISA試劑盒顯色與室溫的關系

時間:2018/2/5閱讀:222
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ELISA試劑盒時刻一般不需要嚴格控制,有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔恰當縮短或延伸反響時刻,及時判別。此刻酶催化無色的底物生成有色的產品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在必定時刻內,陰性孔可堅持無色,而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當進步溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反響溫度和時刻應按規則力求。
TMB受光照的影響不大,ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上,邊反響調查成果。OPD底物顯色一般在室外溫或37 ℃反響20-30分鐘后即不再加深,再延伸反響時刻,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反響應避光進行,顯色反響結束時加入停止液停止反響。OPD產品用硫酸停止后,顯色由橙黃色轉向棕黃色。但為保證實驗成果的穩定性,宜在規則的恰當時刻閱覽成果。TMB經HRP作用后,約40分鐘顯色達高峰,隨即逐步削弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的停止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色維持較長時刻(12-24小時)不褪,是目視判別的杰出停止劑。
此外,ELISA試劑盒各類酸性停止液則會使藍色轉變成黃色,此刻可用特定的波長(450 nm)測讀吸光值。比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,ELISA試劑盒然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的實驗,需先將板置于規范96孔的座架中,才可進行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊際剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。

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