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免疫組化安排樣本的處理辦法

時間:2018/5/3閱讀:219
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安排處理
恰當的安排處理是做好免疫組化染色的先決條件,也是決議染色勝敗的內部因素,在安排細胞材料預備的過程中,不只要求堅持安排細胞形狀完整,更要堅持安排細胞的抗原性不受損或充滿,避免安排自溶。如果呈現自溶壞死的安排,抗原現已丟掉,即運用很活絡的檢測抗體和高明的技能,也很難檢出所需的抗原,反而往往由于安排的壞死或制片時的刀痕擠壓,在上述區域易呈現假陽性成果。
1) 安排及時選材和固定
安排標本及時的選材和固定是做好免疫組化染色的要害*步,是有用避免安排自溶壞死,抗原丟掉的開始,離體安排應趕快的進行選材,2h內,選材時所用的刀應鋒利,要一刀下去切開安排,不行重復切拉安排,形成安排的擠壓,安排塊巨細要適中,一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm,牢記選材時安排塊寧可面積大,千萬不能厚的準則,(也就是說安排塊的面積能夠大到3cm×5cm,但安排塊的厚度千萬不能超越0.2cm,不然將晦氣于安排的均勻固定)。固定液快速滲透到安排內部使安排蛋白能在一定時刻內敏捷凝結。然后無缺的保存抗原和安排細胞形狀。
對于固定液的選擇,準則上講,應根據抗原的耐受性來選擇相應的固定液,但除非是專項科研項目,在病理慣例作業很難做到這一點,由于病理的確診和辨別確診都是在慣例HE病理確診的基礎上決議是否進行免疫組化的染色,而HE染色的慣例安排處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛4倍于安排體積進行安排固定,使用其滲透性強,對安排的作用均勻進行固定,但安排固定時刻在l2h內,一般固定時刻不應超越24小時。隨著固定時刻的延伸對安排抗原的檢出強度將逐步下降。
2) 安排脫水、通明、浸蠟
安排經固定后進行脫水、通明、浸蠟和包埋。把握的準則是脫水通明要充分但不能過,浸蠟時刻要夠,溫度不能高,不然形成安排的硬脆使安排切片困難,即使能切片,由于安排的硬脆,也使切片不能無缺平整,染色過程中極易脫片,對免疫組化染色抗原的定位及布景都晦氣,所以*脫水和二甲苯通明的時刻不宜過長,正常巨細的安排*脫水lh×3次,二甲苯通明lh×2次即可,浸蠟及包埋白臘溫度不要超越65℃。
免疫組化試驗代測之免疫組化的樣本處理切片染色注意事項
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