使用方法：

1、將ELISA試劑盒各組分恢復(fù)室溫（大約30分），同時(shí)用純水將20×洗滌液配成工作液（每份濃縮洗滌液加19份純水）。

2、取出酶標(biāo)板；扣取適量酶標(biāo)板條，每個(gè)標(biāo)本需要8孔，陽(yáng)性對(duì)照8孔，陰性對(duì)照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

3、將標(biāo)本檢測(cè)孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各50μl。然后將50μl細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標(biāo)微孔板，每個(gè)標(biāo)本加8孔；陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照孔不加標(biāo)本稀釋液，各加8孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

4、反應(yīng)完畢后棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。再在每個(gè)標(biāo)本的8孔中分別加入8種酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽(yáng)性、陰性對(duì)照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。每孔分別加入單組份TMB底物液100μl，封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

6、本試劑盒特異性好，可肉眼觀(guān)察顯色結(jié)果，確定顯色孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗判斷此標(biāo)本的Ig類(lèi)或亞類(lèi)。也可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測(cè)定波長(zhǎng)，630nm參考波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果，參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗判定此標(biāo)本的Ig類(lèi)或亞類(lèi)(陽(yáng)性對(duì)照OD一般不小于0.8，陰性對(duì)照一般不高于0.15，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算)。

注：?jiǎn)慰箤儆陔s交瘤融合得來(lái)，存在一定比例的變異，另外，如果待檢樣品濃度太高也容易造成背景偏高，原則上以高值孔對(duì)應(yīng)的亞類(lèi)為準(zhǔn)！

注意事項(xiàng)：

1.  本試劑盒實(shí)際壽命遠(yuǎn)比標(biāo)示的有效期更長(zhǎng)，超過(guò)有效期后可能仍可使用，但是不建議您使用，請(qǐng)您在有效期內(nèi)使用；超過(guò)有效期使用產(chǎn)品產(chǎn)生的問(wèn)題不在售后范疇。

2.  由于腹水成分十分復(fù)雜，本試劑盒不建議用于腹水檢測(cè)，如果需要檢測(cè)腹水，請(qǐng)購(gòu)買(mǎi)本公司其他試劑盒；如果確實(shí)需要用本試劑盒檢測(cè)腹水亞型，建議將腹水稀釋1-5萬(wàn)倍，同時(shí)使用自包被的抗原板子替代本試劑盒中的酶標(biāo)板，此種情況下本試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照可能不能正常工作。

3.  手工洗板時(shí)，洗液要加滿(mǎn)板孔，浸泡10秒然后棄盡，最后要拍干凈。加入的酶標(biāo)二抗溫育后，要把酶標(biāo)液吸凈，不要直接甩出，這個(gè)在手工洗板時(shí)對(duì)結(jié)果很重要。

4.  一次沒(méi)用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

5.  拿放加樣后的板子不要?jiǎng)×叶秳?dòng)，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。

6.  本試劑一般不會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)陽(yáng)性，但出現(xiàn)兩個(gè)陽(yáng)性的現(xiàn)象現(xiàn)實(shí)中是真實(shí)存在的，一般會(huì)取高OD值判為陽(yáng)性，出現(xiàn)這種情況有多重原因：

1）培養(yǎng)的細(xì)胞中有“飼養(yǎng)細(xì)胞"殘留；

2）由于單抗研制存在人工干預(yù)步驟因此抗體本身有可能會(huì)存在亞類(lèi)結(jié)構(gòu)上的輕微變異； 

3）樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，

4）上清出現(xiàn)少量污染；

5）實(shí)驗(yàn)操作粗放；

6）加錯(cuò)試劑；

7）樣品中抗體濃度太高。