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培養(yǎng)人源細(xì)胞的凍存的分析

時(shí)間:2017/8/31閱讀:201
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人源細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。 
1. 凍存細(xì)胞 
(1)選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染),在凍存前1d換液。 
(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,計(jì)數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。 
(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點(diǎn)降低,使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
(4)分裝于無(wú)菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
(5)旋好凍存管并仔細(xì)檢查,一定要蓋緊,做好標(biāo)記。 
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡(jiǎn)易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時(shí)間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促進(jìn)冰晶形成。 
操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套,以免液氮凍傷。 細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。 
1. 凍存細(xì)胞 
(1)選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染),在凍存前1d換液。 
(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,計(jì)數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。 
(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點(diǎn)降低,使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
(4)分裝于無(wú)菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
(5)旋好凍存管并仔細(xì)檢查,一定要蓋緊,做好標(biāo)記。 
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡(jiǎn)易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時(shí)間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,過快能影響人源細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促進(jìn)冰晶形成。 
操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套,以免液氮凍傷。 
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
小鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
人源細(xì)胞

 

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