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上海莼試生物技術有限公司
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干細胞培養之“收到細胞的處理方式”

時間:2017/8/29閱讀:253
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冷凍干細胞解凍程序:
2.1.依據細胞株數據單之基礎培養基種類、血清種類和其它之成份和比例,制備培養基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之血清種類,若因實驗需要,必須有所不同時,務必以緩慢比例漸次改變培養基組成,確定細胞適應后,方進行所需之實驗。
2.2.FBS(fetalbovineserum,胚牛血清),CS(calfserum,小牛血清)和HS(horseserum,馬血清),對細胞而言差異極大,請務必依據細胞株資料單之血清種類培養之。
2.3.將潔特培養基置于37C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內。取出潔特冷凍管,立即放入37C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發生污染。輕搖潔特冷凍管使其在1分鐘內全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內。
2.4.依據細胞種類和濃度,于無菌操作臺內取10ml培養基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25或T75JET培養瓶內之培養基,混合均勻,放入37C,5%CO2培養箱培養。
2.5.對絕大多數細胞而言,1%以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5-10ml潔特培養基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮的潔特培養基,將細胞均勻混合后,轉移至潔特培養瓶中,再放入37°C,5%CO2培養箱培養。
No.2
收到T25JET培養瓶培養出的細胞時,處理方式為︰
1.于寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25flask均加滿潔特培養基。請檢查培養瓶的外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。
 2.將原封之T25JET培養瓶靜置于37°C,5%CO2培養箱中,使干細胞回溫至37°C,并讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內取出JET培養瓶內之培養基,(取出之培養基可以再使用),僅留約5-10ml培養基于JET培養瓶內,依一般培養方式再將細胞置入培養箱中,或細胞已長滿盤,則將細胞做傳代培養。
121-33-5     1g        香蘭素熔點標準物標準品    
121-33-5     200mg    Vanillin     香蘭素標準品    
121412-77-9    200mg    Cefprozil (Z)-Isomer    *(Z)-異構體標準品    
121-54-0    500mg    Benzethonium Chloride    芐索氯銨標準品    
121-57-3     200mg    Sulfanilic Acid     對氨基苯磺酸標準品    
121-59-5    200mg    Carbarsone    卡巴胂標準品    
121-66-4     25mg        硝唑尼特相關物質A標準品    
12167-74-7    1g        磷酸三鈣標準品    
干細胞

 

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