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人源細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項大總結(jié)

時間:2017/8/24閱讀:714
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人源細(xì)胞在單純的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能存活,在特殊類型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些痕量營養(yǎng)物質(zhì)及生長因子才能使細(xì)胞得以生長并維持生長狀態(tài)。基礎(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清,血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗確定,廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子,常選其作增殖細(xì)胞用的血清,也用于細(xì)胞系和原代培養(yǎng)。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。然而,很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養(yǎng),也有人用馬血清來培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞。用大鼠進(jìn)行神經(jīng)元培養(yǎng)的某些研究者喜歡使用同型血清;人類的胎盤血清,亦曾用于神經(jīng)組織的器官類型的培養(yǎng),也用在一些特殊培養(yǎng)種類中。

血清的不同批號含有不同的成分,所以許多人發(fā)現(xiàn),應(yīng)該在使用前對血清進(jìn)行測試。大多數(shù)試劑商提供樣品,所滿意的批號即可選用,這樣可以一次得到足夠一年用量的血清,血清在使用前通常在56℃加熱30分鐘,這一過程稱為滅活。

1979年神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)了一個重要進(jìn)展,用化學(xué)添加劑即可維持神經(jīng)細(xì)胞存活與生長而不需要在培養(yǎng)基中添加血清。其工作基礎(chǔ)是用合適的激素、營養(yǎng)物和促貼壁的物質(zhì)的組合置換培養(yǎng)基中的成分,zui后找到了適合大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)的試劑配方,該配方稱為N2,專門用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng),zui早是用在B104大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的培養(yǎng)。它的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是1:1的DMEM與H12的混合液,添加了胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、腐胺和硒。胰島素和胰島素樣生長因子對于大多數(shù)類型細(xì)胞的存活和生長有重要作用,硒是*產(chǎn)生的合作因子,可能有助于過氧化物和超氧化物的水解,有報道說還能防止細(xì)胞的光照損傷。隨后的其他配方如N1N3則含有較低濃度的轉(zhuǎn)鐵蛋白。

未料到的是上述配方構(gòu)成的培養(yǎng)基可以支持神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系快速增殖,隨后又發(fā)展了能支持原代培養(yǎng)的各種神經(jīng)元生長的培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基在許多實(shí)驗室里已取代了有血清培養(yǎng)。人源細(xì)胞在某些培養(yǎng)方案中,細(xì)胞直接進(jìn)入無血清培養(yǎng),這樣的培養(yǎng)基可以消除來自血清的不均一性。更為重要的是,它們可用來檢測生長因子以及其他促進(jìn)神經(jīng)元存活或生長的因子,或者用來檢測那些可保護(hù)神經(jīng)元免遭環(huán)境毒物損傷的制劑。于神經(jīng)元的培養(yǎng)基在某些培養(yǎng)環(huán)境中還可以減低非神經(jīng)元細(xì)胞的增殖,故可使神經(jīng)元純化。

[Tyr9]- β-促黑激素 (豬)    英文名稱:    [Tyr9]- β-MSH (porcine)    質(zhì)量規(guī)格:    >95%,BR            號:    198281-81-1     
[Val5]-血管緊張素 II 醋酸鹽水合物    英文名稱:    [Val5]-Angiotensin II acetate salt hydrate     質(zhì)量規(guī)格:    美國進(jìn)口            號:    58-49-1 (non-salt)    
?8,9-脫氫雌激素酮 3-硫酸鈉鹽    英文名稱:    ?8,9-Dehydro Estrone 3-Sulfate Sodium Salt    質(zhì)量規(guī)格:    美國進(jìn)口            號:    61612-83-7    
1-(10,12-二十五碳二炔基)溴化吡啶鎓    英文名稱:    1-(10,12-Pentacosadiynyl)pyridinium Bromide    質(zhì)量規(guī)格:                號:    94598-31-9    
人源細(xì)胞

 

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