當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>如何選擇原代細(xì)胞培養(yǎng)的冷凍保護(hù)劑?
原代細(xì)胞冷凍保護(hù)劑是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。冷凍保護(hù)劑常常配制成一定的溶液。一般來講,只有紅細(xì)胞、大多數(shù)微生物和極少數(shù)有核的哺乳動物細(xì)胞懸浮在不加冷凍保護(hù)劑的水或簡單的鹽溶液中,并以Z適的冷凍速率冷凍,可以獲得活的凍存物。
但對于大多數(shù)有核哺乳動物細(xì)胞來說,在不加冷凍保護(hù)劑的情況下,無Z適冷凍速率可言,也不能獲得活的冷凍物。例如將小鼠骨髓細(xì)胞懸浮在不加冷凍保護(hù)劑的平衡鹽溶液中,并以0.3~600℃/min 的冷凍速率降溫冷凍,98% 以上的細(xì)胞會死亡;而加入甘油冷凍保護(hù)劑進(jìn)行冷凍保存時,98% 以上的細(xì)胞都可存活。
冷凍保護(hù)劑可分為滲透性和非滲透性兩類。
01class
滲透性冷凍保護(hù)劑
滲透性冷凍保護(hù)劑可以滲透到細(xì)胞內(nèi),一般是一些小分子物質(zhì),主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。其保護(hù)機(jī)制是在細(xì)胞冷凍懸液*凝固之前,滲透到細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷,同時,細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細(xì)胞過分脫水皺縮。
甘油和DMSO并不防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰,在使用該類冷凍保護(hù)劑時,需要一定的時間進(jìn)行預(yù)冷,讓甘油或DMSO等成分滲透到細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞內(nèi)外達(dá)到平衡以起到充分的保護(hù)作用。
目前DMSO的應(yīng)用比甘油更為廣泛,但要注意的是,DMSO在常溫下對細(xì)胞的毒性作用較大,而在4℃時,其毒性作用大大減弱,且仍能以較快的速度滲透到細(xì)胞內(nèi)。所以,凍存時DMSO平衡多在4℃下進(jìn)行,一般需要40~60分鐘。
02class
非滲透性冷凍保護(hù)劑
非滲透性冷凍保護(hù)劑不能滲透到細(xì)胞內(nèi),一般是些大分子物質(zhì),主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羥乙基淀粉等。原代細(xì)胞其保護(hù)機(jī)制的假說很多,其中有一種可能是,聚乙烯吡咯烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中水分子結(jié)合,降低溶液中自由水的含量,使冰點(diǎn)降低,減少冰晶的形成;同時,由于其分子量大,使溶液中電解質(zhì)濃度降低,從而減輕溶質(zhì)損傷。
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-Bdkrb2/B2R/FITC 熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgG 0.2ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-Bdkrb2/B2R/FITC 熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgG 0.2ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-BDNF 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 0.1ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-BDNF/FITC 熒光素標(biāo)記BDNF蛋白抗體IgG 0.2ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-BDNF/FITC 熒光素標(biāo)記BDNF蛋白抗體IgG 0.2ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-BECN1 BECLIN-1抗體 0.1ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-BECN1/FITC 熒光素標(biāo)記一種抑癌基因抗體IgG 0.2ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-BECN1/FITC 熒光素標(biāo)記一種抑癌基因抗體IgG 0.2ml
規(guī)格: Multi-class antibodies Anti-beta Adaptin/AP2 銜接蛋白β抗體 0.2ml
原代細(xì)胞
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