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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第9年

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ATCC細(xì)胞
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ELISA試劑盒批發(fā)免疫標(biāo)記技術(shù)

時(shí)間:2018/12/20閱讀:225
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     ELISA試劑盒批發(fā)酶標(biāo)抗體或抗抗體(抗免疫球蛋白)結(jié)合物可采用戊二醛法或過碘酸鹽氧化法制備。郭春祥建立的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體的改良過碘酸鈉法簡(jiǎn)單易行,標(biāo)記效果好,特別適用于實(shí)驗(yàn)室的小批量制備。現(xiàn)將操作方法介紹如下: 

    (一) 結(jié)合物的標(biāo)記將5mg HRP溶于05ml蒸餾水中,加入新配制的006mol/L NaIO4水溶液05ml,混勻,置冰箱30min,取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml,室溫放置30min后,加入含5mg純化抗體的水溶液(或PBS)1ml,混勻并裝透析袋,以005mol/L、pH值95碳酸鹽緩沖液緩慢攪拌透析6h(或過一夜)使之結(jié)合,然后吸出加NaBH4溶液(5mg/ml)02ml,置冰箱2h。將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和硫酸銨,冰箱放置30min,離心,將所得沉淀物溶于少許002mol/L、pH值74 PBS中,并對(duì)之透析過一夜。次日再離心除去不溶物,即得酶抗體結(jié)合物。用002mol/L、pH值74 PBS加至5ml,進(jìn)行測(cè)定后,冷凍干燥或低溫保存。 

    (二) 結(jié)合物中HRP與抗體量的測(cè)定酶標(biāo)結(jié)合物于751型分光光度計(jì)上分別用280及403nm波長(zhǎng)測(cè)定其光密度(OD),并計(jì)算出OD403與OD280之比值以及HRP與抗體的mol/L比。

結(jié)合物中HRP濃度(mg/ml)=OD403×04 

結(jié)合物中IgG濃度(mg/ml)=(OD280-OD403×03)×062 

酶/抗體mol/L比=HRP濃度IgG濃度×4 

    (三) 結(jié)合物稀釋度的測(cè)定

用酶結(jié)合物中抗體相應(yīng)的抗原直接包被聚苯乙烯反應(yīng)板,采用ELISA直接法測(cè)定酶結(jié)合物效價(jià)。通常本法制備的酶結(jié)合物作1∶10 000稀釋時(shí),其OD403仍在01以上。

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