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人臍帶間充質干細胞操作步驟

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人臍帶間充質干細胞分離自臍帶;臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。當卵黃囊及其血管退化,臍動脈和臍靜脈就發達起來,在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒。Z后由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運走,某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒。臍帶中含有大量的干細胞,干細胞是生命的種子,它會分化成機體的各種細胞,結出各種不同的果實——血液細胞、神經細胞、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體;這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量,又可進一步分化為各種組織細胞,從而在組織修復等方面發揮積極作用。間充質干細胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞。在不同的誘導條件下,可分化為多種造血細胞以外的組織細胞,并具有造血支持、免疫調節、組織修復等作用;目前,多用于風濕免疫疾病的治療。間充質干細胞(MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。它可分泌多種細胞因子及生長因子,促進造血干細胞(HSC)的增殖與分化。MSCs還具有免疫調節、抗炎和組織修復作用,可減輕移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相關并發癥。

5.培養基信息:

MEMα、FBS、間充質干細胞生長添加劑、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等

我們推薦使用人臍帶間充質干細胞*培養基(產品貨號:HL-H204)作為體外培養人臍帶間充質干細胞的培養基。

二、細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

三、人臍帶間充質干細胞使用方法

在技術部標準操作流程下,人臍帶間充質干細胞可傳8代左右,隨著傳代次數的增加,細胞會呈現老化狀態,生長速度減緩,4代以內細胞狀態;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1.取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。

2.待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3.細胞傳代

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml*培養基終止消化;

3)用吸管輕輕吹打混勻,按1:2-1:3適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;

4)待細胞*貼壁后,培養觀察;之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。

四、注意事項

1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。

3.傳代培養過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4.建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和技術部溝通;由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

5.該人臍帶間充質干細胞只可用于科研。

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