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HPASMC:人肺動脈平滑肌細胞使用說明書

時間:2017-9-19閱讀:246
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HPASMC:人肺動脈平滑肌細胞復蘇細胞注意事項:
1收到細胞后當天換液,全部更換成客戶自己的新鮮培養基,放進培養箱,第二天再消化。
2邊觀察邊消化,根據細胞的形態,終止消化時間,采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣,如可吹打下來,即終止消化??蛻裘鞅容^好的消化時間。
3隨細胞有一份細胞操作說明書,請客戶仔細查看。
4記得加1%雙抗,降低被污染的概率。另外盡早凍存留種,以備后用。
5售后時間為一周,于細胞本身的質量問題,而因乙方自己不當操作(不規范操作,消化過度,不加雙抗導致的污染等)導致的細胞問題不在售后范疇。
6收到細胞后,如細胞狀態不佳,或培養中遇到問題,煩請當天盡快,以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據,請您務必重視。
7剛收到細胞時,胎牛血清可以用15%培養兩三天,利于細胞盡快恢復狀態,細胞狀態穩定后,再調回10%即可。
        【產品規格】    1*10(6)
        【安全級別】    1
        【產品種屬】    人
        【組織來源】    肺動脈
        【細胞形態】    成纖維細胞樣
        【細胞特性】    貼壁
        "細胞培養基的選擇和使用:
MEM:成分簡單,貼壁細胞。
DMEM:分高糖型和低糖型。
IDMEM:適合細胞密度低,生長困難的細胞。如雜交細胞的篩選,DNA轉染后轉化細胞的篩選培養。
RPM1640:應用Z廣泛的培養基之一。懸浮細胞培養,主要針對淋巴細胞,也適合其他細胞。
199、109培養基:成分齊全,培養效果較好。
F10培養基:適合小鼠及人類二倍體細胞培養。
F12培養基:HPASMC:人肺動脈平滑肌細胞適合單細胞分離培養及無血清培養。
         細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
        【培養條件】    詳見細胞說明書
        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次
        【凍存條件】    詳見細胞說明書
        【主要文獻】    請具體查閱相關發表文章
細胞凍存及復蘇基本知識普及:
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。
除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。 
采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。
HPASMC:人肺動脈平滑肌細胞凍存的步驟
(1)選擇處于對數生長期的細胞,在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。
(2)去上清液,加入含20%小牛血清的*培養基,于4℃預冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養的細胞類型來選擇。
(3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數)
(4)將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。
(5)細胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只凍存管細胞復蘇培養,觀察生長情況,然后再繼續凍存。
如何進行細胞復蘇:
1. 從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,并不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管,打開蓋子,用吸管吸出細胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養液,混勻;
3. 離心, 1000rpm,5min;
4. 棄去上清液,加入含10%小牛血清培養液重懸細胞,計數,調整細胞密度,接種培養瓶,37℃培養箱靜置培養;
5. 次日更換一次培養液,繼續培養。
溫馨提醒
1.從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存,但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液;
2.將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作(戴棉手套),以免凍傷;
3.HPASMC:HPASMC:人肺動脈平滑肌細胞凍存和復蘇用新配制的培養液。
細胞復蘇的時候,有些初次實驗員將凍存管從液氮中取出后,放在室溫下,經常發生凍存管爆炸,該怎么避免出現這種情況嗎?其中在擰緊凍存管的時候是否有哪些細節要注意的?

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